ISOLASI DENDRITIC CELL DARI PARU

download

  1. Bagian Paru Mencit (diambil bagian kanan), Diletakkan pada sel strainer 50-100 mesh yg berada dalam petridish yang telah di isi dengan PBS 1 mL (petridish posisi berada iatas es)
  2. dihancurkan menggunakan planger (pangkal spuit) dengan cara di tekan-tekan
  3. dipindahkan cairan yang telah melalui sel strainer ke falcon 15 mL
  4. dibilas sel strainer dan petri dengan 1 mL PBS
  5. dipindahkan lagi cairan pada falcon yang sama
  6. ditambah 1mL 50% (mg/mL) Colagenase IA + 2% (mg/mL) DNAse dalam PBS, dan dihomogenkan
  7. diincubasi pada incubator suhu 37oC selama 30 menit, dan setiap 5/10 menit dikocok
  8. disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit, supernatannya dibuang dan diperoleh pelet
  9. pelet ditambah 2 mL RBC Lisis buffer, dihomogenkan
  10. diinkubasi 1 menit RT
  11. disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit, supernatannya dibuang dan diperoleh pelet
  12. pelet ditambah 2 mL PBS (untuk proses washing), dihomogenkan
  13. disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit, supernatannya dibuang dan diperoleh pelet
  14. pelet dipindahkan pada ependof 1,5 mL
  15. ditambah 10 µL CDIIC mouse mocrobeads
  16. diinkubasi selama 15 menit pada 4oC (selama inkubasi kolom max dicuci dengan PBS 500 µL)
  17. dilewatkan pada kolom max, ditunggu sampai tetesan terakhir
  18. ditambah 800 µL 2% FCS-PBS
  19. ditampung dengan ependof 1,5 mL
  20. disentrifuse 5 menit 2500 rpm 4oC, supernatannya dibuang dan diperoleh pelet
  21. pelet ditambah 200 µL tri Reagen
  22. dipipeting sampai homogen
  23. hasil disimpan pada suhu -80oC untuk proses isolasi RNA

 

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>