ISOLASI CD4 T-CELL DARI SPLEEN/LIMPHNODE

download

  1. Spleen atau Limphnode, Diletakkan pada sel strainer 50-100 mesh yg berada dalam petridish yang telah di isi dengan PBS 1 mL (petridish posisi berada iatas es)
  2. dihancurkan menggunakan planger (pangkal spuit) dengan cara di tekan-tekan
  3. dipindahkan cairan yang telah melalui sel strainer ke falcon 15 mL
  4. dibilas sel strainer dan petri dengan 1 mL PBS
  5. dipindahkan lagi cairan pada falcon yang sama
  6. disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit, supernatan dibuang, diperoleh pelet
  7. pelet ditambah 2 mL RBC Lisis buffer, dihomogenkan
  8. diinkubasi 1 menit RT
  9. disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit, supernatan dibuang, diperoleh pelet
  10. pelet ditambah 2 mL PBS (untuk proses washing), dihomogenkan
  11. disentrifuse 1500 rpm selama 5 menit, supernatan dibuang, diperoleh pelet
  12. pelet dipindahkan pada ependof 1,5 mL
  13. ditambah 10 µL CD4 mouse mocrobeads
  14. diinkubasi selama 15 menit pada 4oC (selama inkubasi kolom max dicuci dengan PBS 500 µL)
  15. dilewatkan pada kolom max, ditunggu sampai tetesan terakhir
  16. ditambah 800 µL 2% FCS-PBS
  17. ditampung dengan ependof 1,5 mL
  18. disentrifuse 5 menit 2500 rpm 4oC, supernatan dibuang, diperoleh pelet
  19. pelet ditambah 200 µL tri Reagen
  20. dipipeting sampai homogen
  21. hasil disimpan pada suhu -80oC untuk proses isolasi RNA

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>