Isolasi DNA Dari Bercak Darah Kering (Dry Blood Spots) QIAamp(R) DNA Micro Kit

Prosedur isolasi DNA dari bercak darah kering adalah sebagai berikut :

  1. Siapkan 3 potong bercak darah kering dengan diameter 3 mm dan masukkan pada tube Mikrosentrifuse
  2. Ditambahkan 180 μL Buffer ATL
  3. Ditambahkan 20 μLproteinase K dan di vortek untuk menghomogenkan (tidak boleh lebih 5 detik)
  4. Diinkubasi pada suhu 56oC dengan dishaker 900 rpm selama 1 jam (Seandainya tidak ada alatnya, bisa menggunakan heater 56oC dan divortex selama 10 detik setiap 10 menitnya)
  5. Disentrifuse sebentar supaya turun kebawah kira-kira 2500 rpm selama 10 detik
  6. Ditambah 200 μL buffer AL dan di vortek untuk selama 10 detik.
  7. Diinkubasi pada suhu 70oC dengan dishaker 900 rpm selama 10 menit (Seandainya tidak ada alatnya, bisa menggunakan heater 70oC dan divortex selama 10 detik setiap 3 menitnya)
  8. Disentrifuse sebentar supaya turun kebawah kira-kira 2500 rpm selama 10 detik
  9. Dipindahkan dengan hati-hati “lysate” (cairan yang mengandung darah dari bercak darah kering yang terlisiskan) kedalam kolom QIAamp MinElute (QM) tanpa membasahi bibir. Dan disentrifuse 8000 rpm selama 1 menit pada RT. Dipindahkan kolom QM pada collection tube yang bersih lainnya.
  10. Ditambahkan 500 μL Buffer AW1 tanpa membasahi bibir. Dan disentrifuse 8000 rpm selama 1 menit pada RT. Dipindahkan kolom QM pada collection tube yang bersih lainnya.
  11. Ditambahkan 500 μL Buffer AW2 tanpa membasahi bibir. Dan disentrifuse 8000 rpm selama 1 menit pada RT. Dipindahkan kolom QM pada collection tube yang bersih lainnya.
  12. Disentrifuse pada kecepatan max (14000 rpm) selama 3 menit pada RT untuk mengeringkan membrane dengan sempurna
  13. Dipindahkan kolom QM pada microcentrifuge tube (ependof) 1,5mL yang bersih. Ditambahkan 100 μL buffer AE.
  14. Diinkubasi pada RT selama 1 menit. Disentrifuse kecepatan max (14000 rpm) selama 1 menit.

Pembuatan larutan buffer:

  1.  Buffer AW1 = 1,9 mL Buffer AW1 + 2,5 mL ethanol abs. pa.
  2. Buffer AW2 = 1,3 Buffer AW2 + 3 mL ethanol abs. pa.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *

You may use these HTML tags and attributes: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>